"Временные методические указания по определению остаточных количеств препарата 320-К в зерне и воде тонкослойной хроматографией"
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 N 3890-85)	
Документ предоставлен КонсультантПлюс

www.consultant.ru

Дата сохранения: 04.09.2018

Источник публикации
"Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Часть 17". М., 1988
Примечание к документу

Название документа
"Временные методические указания по определению остаточных количеств препарата 320-К в зерне и воде тонкослойной хроматографией"
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 N 3890-85)

Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
22 мая 1985 г. N 3890-85

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРЕПАРАТА 320-К
В ЗЕРНЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Краткая характеристика препарата

Препарат 320-К - новый отечественный гаметоцид для стерилизации пыльцы зерновых культур и подсолнечника. Действующее начало препарата - калиевая соль цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновой кислоты.

       CH
       │ 3
      / \   COOK                                        C H  O K.
     /   \ /                                             8 11 2
    ││    │
    ││    │                                             Мол. масса 178,264.
     \   /
      \ /

    В  чистом  виде  соль  320-К  -  твердое  вещество белого цвета, весьма
гигроскопичное,  хорошо  растворимое  в  воде,  практически нерастворимое в
органических растворителях.
    ЛД    для  белых беспородных  мышей - 1,417  г/кг, введение препарата в
      50
желудок  белых  крыс  на  уровне 1000 мг/кг массы тела не  вызывало  гибели
животных.
ПДК в зерне и воде еще не установлено.

2. Методика определения препарата 320-К в зерне и воде
тонкослойной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода
Метод основан на превращении соли 320-К в кислоту 320 (цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновую) и экстракции последней ацетоном, обработкой измельченного зерна смесью 0,1 н HCl и ацетона. После упаривания ацетона кислоту 320 извлекают из водного слоя бензолом. Конечное определение проводят хроматографией на пластинках Silufol UV 254.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
    Диапазон измеряемых концентраций
      0,1 - 0,5 мг/кг в зерне
      0,002 - 0,02 мг/кг в воде
    Предел обнаружения - 2 - 10 мкг в хроматографируемой пробе.
    Предел обнаружения - 0,1 мг/кг в зерне и 0,002 мг/кг в воде.
                                                                      _
    Среднее  значение  определения  стандартных  количеств  препарата с при
    n = 15
      85,0% в зерне
      80,0% в воде
    Стандартное отклонение S при n = 15
      +/- 10,0% для зерна
      +/- 8,0% для воды
    Относительное стандартное S
                               2
      +/- 12,9 для зерна
      +/- 10,3 для воды
    Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5
      85,0 +/- 12,9% для зерна
      80,0 +/- 10,3% для воды
    Размах варьирования R
      70 - 100% для зерна
      70 - 95% для воды

2.1.3. Избирательность метода
Метод селективен. Хлорорганические и фосфорорганические пестициды определению не мешают.

2.2. Реактивы и материалы

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 2603-71 Постановлением Госстандарта СССР от 17.04.1979 N 1404 с 1 июля 1980 года введен в действие ГОСТ 2603-79.	
Ацетон, ГОСТ 2603-71, осч
Бензол, ГОСТ 5955-75, осч
Диоксан, ГОСТ 10455-63, хч
Хлороформ, ТУ 6-09-4263-76, хч
Спирт этиловый 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77
Муравьиная кислота, ГОСТ 5848-73, хч
Уксусная кислота, ГОСТ 18290-72, хч
Натрий углекислый кислый, ГОСТ 4283-79, хч
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, ГОСТ 11773-76, хч
Магний сернокислый, ГОСТ 4523-77, хч
Соляная кислота, ГОСТ 3118-77, хч
Цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновая кислота (320)
Индикаторная универсальная бумага, ТУ 6-09-1181-71
Бромфеноловый синий индикатор, ТУ 6-09-1058-76, чда
Метиловый красный индикатор, ТУ 6-09-4070-75, чда
Стандартные растворы кислоты 320 в бензоле с содержанием 100 мкг (раствор А) и 10 мкг (раствор Б)
Спиртовой раствор бромфенолового синего и метилового красного (раствор В)
Водный 0,1 М раствор натрия фосфорнокисл. двузамещен. (раствор Г)
Пластинки Silufol UV 254 15 х 15 см
0,1 н раствор соляной кислоты
5-процентный раствор бикарбоната натрия

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Гомогенизатор тканей типа РТ-1
Магнитная мешалка типа ММ 2А (Чехословакия)
Ротационный вакуумный испаритель типа Unipan-350 (Польша)
Весы аналитические типа ВЛА-200М
Микрошприц на 10 мкл типа МШ-10, ТУ 2-833-106
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 100 мл

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 10394-72 Постановлением Госстандарта СССР от 15.07.1982 N 2670 с 1 января 1984 года введен в действие ГОСТ 25336-82.	
Колбы плоскодонные с притертыми пробками, ГОСТ 10394-72, на 100 мл
Колбы круглодонные с притертыми пробками, ГОСТ 10394-72, емкостью 100 мл и 20 мл
Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-80
Пипетки, ГОСТ 1770-74, на 1 мл и 10 мл
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл, 50 мл и 10 мл
Камеры хроматографические, ГОСТ 10565-75
Воронки делительные, ГОСТ 10054-75, на 250 мл и 1500 мл
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74
Пробирки калиброванные, ГОСТ 10394-72, на 5 мл

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартных растворов кислоты 320 в бензоле
Для приготовления стандартного раствора А в мерной колбе емкостью 100 мл взвешивают 100 мг кислоты 320 с точностью +/- 0,0002 г. Содержимое колбы растворяют в 30 мл бензола и затем доводят объем раствора до метки тем же растворителем. Для приготовления раствора Б из раствора А пипеткой отбирают 10 мл, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и добавлением бензола доводят объем раствора до метки.
Растворы А и Б при хранении при комнатной температуре стабильны в течение года.
2.4.2. Приготовление растворов для проявления хроматограмм
Для приготовления раствора В в мерной колбе на 100 мл взвешивают 20 мг бромфенолового синего и 60 мг метилового красного, растворяют красители в 50 мл спирта и прибавлением спирта доводят объем раствора до метки.
Раствор красителей при хранении в течение месяца в холодильнике стабилен.
    Для  приготовления  раствора  Г  в мерной колбе на 100  мл  растворяют:
г Na HPO  х 12 H O в 50 мл воды и доводят объем раствора до 100 мл.
    2   4       2
Раствор Г стабилен при хранении при комнатной температуре в течение года.
Раствор для проявления хроматограмм опрыскиванием готовят непосредственно перед употреблением смешиванием равных объемов растворов В и Г.

2.5. Отбор проб

Отбор проб для анализа проводят в соответствии с утвержденными Министерством здравоохранения СССР "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов внешней среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
Из партии зерна, подлежащей анализу, отбирают 11 г (при необходимости зерно предварительно подсушивают), измельчают с помощью гомогенизатора тканей и отбирают навеску массой 10 г.

2.6. Проведение определения

    Навеску  измельченного  зерна (10 г) помещают в коническую плоскодонную
колбу  емкостью  100 мл, добавляют 10 мл 0,1 н HCl и 20 мл ацетона. Кислоту
320  экстрагируют  перемешиванием  в  течение  часа  на  магнитной мешалке.
Экстракт  отделяют  от  зерна  фильтрованием  на воронке Бюхнера с бумажным
фильтром, собирая в круглодонную колбу емкостью 100 мл. Экстракцию ацетоном
(порциями  по  20  мл) повторяют еще два раза. Из объединенного экстракта с
помощью ротационного вакуумного испарителя упаривают ацетон (на поверхности
водного  остатка  появляются  жирные  пятна).  Водный  остаток  переносят в
делительную  воронку  емкостью 250 мл, колбу дважды смывают подкисленной до
pH = 3 водой (порциями по 5 мл) и дважды бензолом (порциями по 5 мл). Сливы
также  переносят в делительную воронку. Далее водный слой отделяют и трижды
экстрагируют бензолом (объем бензола каждый раз равен объему водного слоя).
Объединенный   бензольный  экстракт  энергично  перемешивают  10  минут  на
магнитной мешалке с 5-процентным раствором  NaHCO ,  прибавляя  последний в
                                                 3
количестве,  необходимом  для  того,  чтобы  рН  смеси  был  9 - 10.  После
обработки водный  слой  отделяют на делительной  воронке, а бензольный слой
промывают 3 раза водой (объем воды равен 1/4 объема бензольного слоя). Воду
от промывки объединяют с водным слоем. Суммарный водный слой подкисляют 0,1
н HCl до рН  3 и трехкратно экстрагируют бензолом (объем бензола каждый раз
равен  объему  водного слоя). Объединенный  бензольный  экстракт  сушат над
прокаленным  MgSO ,  далее  сушитель   отфильтровывают,   промывают   сухим
                 4
бензолом,  который  после  промывки  объединяют  с  бензольным  экстрактом.
Полученный  бензольный  раствор  упаривают  сначала  с помощью ротационного
вакуумного  испарителя, а затем струей воздуха до объема 0,5 мл и с помощью
капилляра количественно наносят на пластинку Silufol UV 254.
Для обнаружения препарата 320-К в воде пробу воды - 1 литр помещают в делительную воронку емкостью 1500 мл, воду подкисляют конц. HCl до рН 3 и экстрагируют кислоту 320 бензолом трижды порциями по 100 мл. Бензольный экстракт сушат над прокаленным сульфатом магния, фильтруют порциями через бумажный фильтр в круглодонную колбу емкостью 20 мл. Далее поступают, как описано выше для зерна.
Условия хроматографирования.
Сконцентрированный до 0,2 - 0,5 мл экстракт с помощью стеклянного капилляра количественно с помощью бензола переносят на пластинку Silufol UV 254 размером 15 x 15 см. Справа и слева на пластинку наносят серию стандартных растворов кислоты 320 с содержанием последней 1, 2, 3, 4 и 5 мкг. Серию стандартных растворов кислоты 320 получают следующим образом: в градуированные пробирки на 5 мл пипеткой последовательно помещают 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора Б, что соответствует 1, 2, 3, 4 и 5 мкг кислоты 320. В последних трех пробирках концентрируют раствор до 0,2 - 0,3 мл струей воздуха. Затем из каждой пробирки капилляром количественно с помощью бензола переносят стандарты на хроматографическую пластинку.
    Хроматограмму  развивают  в системе бензол:диоксан:хлороформ:муравьиная
кислота   (5:1:2:0,02)   или  в  системе  бензол:диоксан:хлороформ:уксусная
кислота (10:2:5:0,02). Хроматограмму сушат на воздухе, а затем обрабатывают
опрыскиванием из пульверизатора проявителем, приготовленным непосредственно
перед  обработкой  смешением  равных  объемов  растворов В и Г. Кислота 320
проявляется  на  хроматограмме  в виде красного пятна на зеленом фоне, R  в
                                                                        f
первой системе - 0,39 +/- 0,1, а во второй - 0,64 +/- 0,4.

2.7. Обработка результатов анализа

Количественное определение препарата 320-К проводят методом соотношения со стандартами по площади и плотности пятна кислоты 320.
Содержание препарата 320-К в мг/кг или в мг/л вычисляют по формуле:

                               А х V х 178,264
                           Х = ----------------,
                               Р х V  х 140,184
                                    а

    где:
    А  -  количество  кислоты  320,  найденное  в  пробе путем сравнения со
стандартами, мкг;
    Р - навеска зерна в г или объем анализируемой воды в мл;
    178,264 - мол. вес препарата 320-К;
    140,184 - мол. вес кислоты 320;
    V - конечный объем раствора, мл;
    V  - объем аликвоты, взятой для хроматографирования, мл.
     а

3. Требования безопасности

Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с легко воспламеняющимися жидкостями и концентрированными кислотами.

4. Настоящая Методика разработана сотрудниками Института биоорганической химии им. Шемякина АН СССР Егоровым И.В. и Граменицкой В.Н.
5. Методические указания апробированы во ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.) и в институте органической химии им. Зелинского (Громова Г.П.).