"Временные методические указания по определению ацетала в воде, почве, картофеле, зерне и зеленой массе кукурузы и сои методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 N 4029-85)	
Документ предоставлен КонсультантПлюс

www.consultant.ru

Дата сохранения: 04.09.2018

Источник публикации
"Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Часть 17", М., 1988
Примечание к документу
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
Название документа
"Временные методические указания по определению ацетала в воде, почве, картофеле, зерне и зеленой массе кукурузы и сои методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 N 4029-85)

Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
21 ноября 1985 г. N 4029-85

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ АЦЕТАЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КАРТОФЕЛЕ, ЗЕРНЕ
И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ КУКУРУЗЫ И СОИ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ
И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия Временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого вещества

Название по номенклатуре СЭВ, МОС: ацетал.
Химическое название д.в.: 2-хлор-N-этоксиметил-2-метил-6-этилацетанилид.
Структурная формула:

          CH
          / 3 CH OC H
      ───    /  2  2 5
    //   \\-N
    \ ___ /  \
      ───     COCH Cl
          \       2
           C H
            2 5

    Эмпирическая формула: C  H  O NCl.
                           14 20 2
    Молекулярная масса 269,765.
    Синонимы: ацетохлор, невирекс - 60ES.
    Физические и химические свойства:
    Жидкость  темно-желтого  цвета с температурой кипения 125 °С при 40 Па.
Растворим  в  органических растворах. В воде практически нерастворим.  ЛД
                                                                         50
(орально) 1160 мг/кг.
Применятся в качестве предвсходового гербицида на посевах сои, кукурузы и посадках картофеля.

2. Методика определения ацетала в воде, почве, картофеле,
зерне и зеленой массе кукурузы и сои газожидкостной
и тонкослойной хроматографией

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода
Метод основан на экстракции пестицида из анализируемых проб органическим растворителем, очистке экстрактов почвы - водно-ацетоновой коагуляцией и переэкстракцией гексаном; зерна и зеленой массы кукурузы и сои - переэкстракцией из гексана ацетонитрилом, колоночной хроматографией экстрактов и определении газожидкостной хроматографией с применением детектора по захвату электронов или тонкослойной хроматографией (пластинки "Силуфол", подвижная фаза: четыреххлористый углерод - ацетонитрил в соотношении 10:1; проявитель 0,25% спиртовой раствор дифениламина, УФ-облучение).
2.1.2. Метрологическая характеристика методов приведена в табл. 1.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЦЕТАЛА
ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ

┌────────────────┬────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│Метрологические │                  Значения метрологических характеристик                    │
│ характеристики ├───────────────────────────────────────┬────────────────────────────────────┤
│                │                  ГЖХ                  │                 ТСХ                │
│                ├───────┬───────┬───────┬───────┬───────┼───────┬──────┬──────┬──────┬───────┤
│                │ вода  │ почва │карто- │ зерно │зеленая│  вода │почва │карто-│зерно │зеленая│
│                │       │       │фель   │       │ масса │       │      │фель  │      │ масса │
├────────────────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼───────┼──────┼──────┼──────┼───────┤
│Диапазон        │0,002 -│0,005 -│0,005 -│0,008 -│0,004 -│0,004 -│0,02 -│0,02 -│0,04 -│0,02 - │
│определяемых    │1,0    │0,5    │0,5    │0,2    │0,1    │2      │2     │2     │0,8   │0,4    │
│концентраций,   │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│мг/кг (мг/л)    │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│                │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│Предел          │0,0002 │0,0002 │0,0002 │0,0002 │0,0002 │1      │1     │1     │1     │1      │
│обнаружения, мкг│       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│                │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│Предел обнаруже-│0,001  │0,005  │0,005  │0,008  │0,004  │0,02   │0,02  │0,02  │0,04  │0,02   │
│ния в пробах,   │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│мг/кг (мг/л)    │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│                │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│Среднее значение│90,4   │88     │92,7   │80     │78,6   │86     │84    │87,2  │70,5  │72     │
│определения, %  │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│                │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│Число параллель-│6      │10     │9      │6      │9      │6      │6     │6     │6     │6      │
│ных определений │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│                │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│Стандартное     │2,8    │3,1    │2,05   │4,52   │3,6    │2,9    │4,3   │5,45  │4,1   │5,9    │
│отклонение      │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│                │       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
│Доверительный   │90,4   │88 +/- │92,7   │80 +/- │78,6   │86 +/- │84 +/-│87,2  │70,5  │72 +/- │
│интервал        │+/- 3,2│2,2    │+/- 1,6│4,74   │+/- 2,8│3      │4,5   │+/-   │+/-   │6,19   │
│среднего при    │       │       │       │       │       │       │      │5,7   │4,3   │       │
│Р = 0,95 и n = 1│       │       │       │       │       │       │      │      │      │       │
└────────────────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴───────┴──────┴──────┴──────┴───────┘

2.1.3. Избирательность метода
Определению ацетала на мешают пестициды типа анилидов бензолкарбоновых кислот, ХОП, симм. триазины.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетал, содержание основного вещества не менее 96%.
Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.
Гексан, ч, ТУ 6-09-3375-78.
Ацетонитрил, ч, ТУ 6-09-35-34-82.

КонсультантПлюс: примечание.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: стандарт имеет номер ГОСТ 5955-75, а не ГОСТ 5955-81.	
Бензол, чда, ГОСТ 5955-81.
Толуол, чда, ГОСТ 5789-78.
Спирт этиловый технический, ГОСТ 18300-72.
Четыреххлористый углерод, ГОСТ 20288-81.
Дифениламин, чда, ГОСТ 5825-81.
Фосфорно-молибденовая кислота, хч, ТУ 6-09-3540-78.

КонсультантПлюс: примечание.
В официальном тексте документа, видимо, допущена опечатка: стандарт имеет номер ГОСТ 4166-76, а не ГОСТ 4166-81.	
Натрий сернокислый безводный, чда, ГОСТ 4166-81.
Силикагель марки КСК, зернение 0,25 - 0,50 мм, ГОСТ 3956-76.
Пластина "Силуфол" без люминофора 150 х 150 см производства ЧССР.
Алюминия оксид L 40/250 нейтральный для хроматографии производства ЧССР.
Хроматон N-AW-ДMCS (фр. 0,20 - 0,25 мм) с 5% силикона SE-30.
Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74, в баллоне с редуктором.
Фильтры бумажные беззольные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77.

2.3. Приборы, аппаратура и посуда

Хроматограф "Газохром 1106Э" или любой аналогичный прибор с детектором по захвату электронов.
Колонка стеклянная размером 150 х 0,3 см.
Колонки стеклянные размером 30 х 0,8 см.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Аппарат для встряхивания АВУ-1 или аналогичный, ТУ 64-1-1081-73.
Микрошприц емкостью 10 мкг, ТУ 2-833-106.
Кофемолка.
Вакуум-насос, ГОСТ 10696-75.

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 10394-72 Постановлением Госстандарта СССР от 15.07.1982 N 2670 с 1 января 1984 года введен в действие ГОСТ 25336-82.	
Колбы грушевидные для отгонки растворителя, ГОСТ 10394-72.
Колбы мерные, цилиндры, мензурки, ГОСТ 1770-74.
Пипетки различной емкости, ГОСТ 20292-74.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75, диаметром 56 мм.
Воронки делительные, ГОСТ 8613-75, емкость 100, 250 и 500 мл.
Колба Бунзена, ТУ 25-1173-75.
Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-80.
Колбы конические плоскодонные различной емкости, ГОСТ 1770-74.
Стаканы химические, ТУ 25-11-944-84.
Весы аналитические ВЛА-200м.
Весы технические.
Камера хроматографическая стеклянная, ГОСТ 10565-75.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Микропипетка или стеклянный капилляр.
Источник УФ-света ВИО-1, ТУ 3-3-1304-75.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Приготовление стандартного раствора ацетала
Стандартный раствор ацетала с концентрацией 1 мг/мл готовят в мерной колбе емкостью 100 мл растворением навески 0,1 г в 100 мл толуола. Раствор устойчив в течение 10 дней.
2.4.2. Приготовление градуировочных растворов и построение калибровочного графика
В семь пробирок вносят 1, 2, 4, 5, 10, 15 и 20 мкл стандартного раствора ацетала и приливают по 10 мл толуола. Хроматографируют по 2 мкл каждого из полученных растворов, что соответствует 0,0001; 0,0002; 0,0004; 0,0005; 0,001; 0,0015 и 0,002 мкг ацетала. Хроматографирование каждого раствора проводят трижды и строят график зависимости средних высот пиков в мм от количества ацетала в мкг.
2.4.3. Подготовка хроматографической колонки для ГЖХ
Хроматографическую колонку размером 150 х 0,3 см заполняют хроматоном N-AW-ДMCS с нанесенной на него в количестве 5% неподвижной жидкой фазой SE-30, устанавливают в термостат хроматографа и стабилизируют в токе газа-носителя (скорость 30 - 50 мл/мин.) при температуре 250 °С в течение 40 ч и 300 °С - в течение 6 ч.
2.4.4. Подготовка абсорбционной колонки с сорбентом N 1 для очистки экстрактов при определении методом ГЖХ
Колонку размером 30 х 0,8 см заполняют на высоту 5 см нейтральным оксидом алюминия и промывают 5 мл ацетона, затем 10 мл гексана.
2.4.5. Подготовка адсорбционной колонки с сорбентом N 2 для очистки экстракта при определении методом ТСХ
Колонку размером 30 х 0,8 см заполняют на высоту 2 см нейтральным оксидом алюминия, затем на высоту 5 см - силикагелем КСК и промывают, как описано в п. 2.4.4.
2.4.6. Приготовление подвижной фазы
В хроматографической камере за 30 мин. до хроматографирования смешивают четыреххлористый углерод и ацетонитрил в соотношении 10:1.

КонсультантПлюс: примечание.
Нумерация пунктов дана в соответствии с официальным текстом документа.	
2.4.5. Приготовление проявляющего реактива
0,25% раствора дифениламина готовят растворением 0,25 г в 100 мл этилового спирта. Раствор устойчив в течение недели.
2.4.6. Приготовление стандартной шкалы для тонкослойной хроматографии
На пластине "Силуфол" на расстоянии 15 мм от края намечают линию старта, на которую наносят в виде отдельных пятен на расстоянии 15 мм друг от друга 1, 2, 5, 10 и 20 мкл стандартного раствора ацетала, что соответствует 1, 2, 5, 10 и 20 мкг вещества.

2.5. Отбор проб

Отбор проб проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979, N 2051-79.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов
Вода. 10 - 250 мл средней пробы воды помещают в делительную воронку и ацетал экстрагируют двумя порциями гексана по 50 мл. Гексановые экстракты последовательно один за другим пропускают через безводный сернокислый натрий (20 г), помещенный на бумажный фильтр в химическую воронку. Растворитель удаляют до 1 - 2 капель в остатке (ротационный испаритель, ток воздуха). Остаток растворяют в 10 мл ацетона и аликвоту хроматографируют.
Почва. 10 - 50 г средней воздушно-сухой пробы почвы помещают в коническую колбу с притертой пробкой и экстрагируют дважды смесью ацетона (25 мл) и бензола (25 мл), встряхивая каждый раз в течение 30 мин. Почву отфильтровывают под вакуумом, объединенный экстракт пропускают через безводный сернокислый натрий (20 г), растворители отгоняют на ротационном испарителе до объема 0,5 - 1 мл, затем досуха - в токе воздуха.
Остаток растворяют в смеси 5 мл ацетона и 25 мл дистиллированной воды, встряхивая в течение 3 - 5 мин. Выпавшие хлопья отфильтровывают через бумажный фильтр, помещенный в коническую воронку, и ацетал дважды экстрагируют из фильтрата гексаном порциями по 50 мл. Гексановый экстракт пропускают через безводный сернокислый натрий (20 г), гексан отгоняют до объема 5 мл. Аликвоту полученного раствора хроматографируют.
Картофель. Навеску пробы (10 - 50 г) измельчают, помещают в коническую колбу с притертой пробкой и экстрагируют гексаном (50 мл) при встряхивании в течение 30 мин. Гексановый экстракт сливают в делительную воронку. Пробу картофеля дважды промывают свежими порциями гексана (по 30 мл). Объединенные гексановые вытяжки промывают дважды дистиллированной водой (по 30 мл) и сушат, пропуская через слой безводного сернокислого натрия (20 г). Гексан отгоняют на ротационном испарителе, затем отдувают в токе воздуха до 1 - 2 капель в остатке. Остаток растворяют в 5 мл ацетона и аликвоту полученного раствора хроматографируют.
Зеленая масса. 10 - 50 г пробы измельчают ножницами или ножом, помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 50 мл ацетона, экстрагируют при встряхивании в течение 30 мин. и отфильтровывают под вакуумом. Пробу экстрагируют повторно свежей порцией ацетона (50 мл). Экстракты объединяют, приливают 100 мл гексана, тщательно встряхивают с 20 г хлористого натрия, выделившийся водный слой отделяют и экстрагируют его 50 мл гексана. Органические слои объединяют, смешивают в делительной воронке и выделившееся небольшое количество воды сливают. Органический экстракт пропускают через слой безводного сернокислого натрия (40 г) в химической воронке и концентрируют до отсутствия запаха растворителей (ротационный растворитель, ток воздуха). Маслянистый остаток растворяют в 20 мл гексана и встряхивают в течение 1 мин. с 5 мл 40% водной суспензии фосфорно-молибденовой кислоты. Водный слой отделяют, гексановый - экстрагируют 10 мл дистиллированной воды, пропускают через слой безводного сернокислого натрия (20 г), после чего сернокислый натрий промывают 10 мл гексана. Из гексанового раствора ацетал дважды экстрагируют ацетонитрилом порциями 30 и 20 мл. Ацетонитрильный (нижний) слой пропускают через бумажный фильтр и концентрируют (ротационный растворитель, ток воздуха) до 1 - 2 капель в остатке.
Остаток переносят количественно тремя порциями гексана по 1 - 2 мл в колонку с сорбентом N 1 и элюируют 50 мл гексана (элюат отбрасывают) и 10 мл смеси гексан - ацетон в соотношении 10:1. Второй элюат концентрируют до объема 2 мл и аликвоту раствора хроматографируют.
Для тонкослойной хроматографии остаток после отгонки ацетонитрила очищают на колонке с сорбентом N 2 при тех же условиях элюирования, что и на колонке с сорбентом N 1.
Зерно кукурузы и сои. 25 г зерна измельчают на кофемолке, помещают в коническую колбу с притертой пробкой и дважды экстрагируют ацетоном порциями 50 и 25 мл при встряхивании по 30 мин. Экстракты фильтруют под вакуумом. К фильтрату приливают 100 мл гексана, раствор пропускают через безводный сернокислый натрий (20 г) и концентрируют (ротационный растворитель, ток воздуха) до отсутствия запаха растворителей.
Остаток (масло) растворяют в 30 мл гексана, ацетал экстрагируют ацетонитрилом и экстракт очищают на колонках, как описано для зеленой массы (ГЖХ и ТСХ).
2.6.2. Хроматографирование
2.6.2.1. Газожидкостная хроматография
Аликвоту очищенных экстрактов хроматографируют при следующих условиях:
                                     -11
    рабочая шкала электрометра 9 х 10    а;
скорость протяжки картограммы 600 мм/час;
колонка стеклянная длиной 150 см, внутренним диаметром 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-ДMCS (фр. 0,20 - 0,25 мм) с 5% силикона SE-30;
температура (°С) термостата колонок 200, испарителя - 225, детектора - 230;
расход газа-носителя в мл/мин.: через колонку 40 +/- 2, продувочную камеру детектора 60 +/- 2;
линейность детектирования от 0,0002 до 0,002 мкг;
объем, вводимый в испаритель, 2 - 4 мкг;
минимально детектируемое количество 0,0001 мкг;
абсолютное время удерживания 2,25 мин.;
альтернативная колонка: длина 150 см, внутренний диаметр 3 мм, заполненная хроматоном N-AW-ДMCS с 5% силикона ХЕ-60;
абсолютное время удержания при тех же условиях 4,4 мин.
Хроматографирование проводят трижды, измеряют высоту пиков, соответствующих ацеталу, вычисляя среднее значение. По среднему значению высоты пика и калибровочному графику находят количество ацетала в аликвоте.
2.6.2.2. Тонкослойная хроматография
Очищенные экстракты проб концентрируют до 1 - 2 капель растворителя, стенки колбы обмывают 0,5 - 1 мл гексана, гексан отдувают в слабом токе воздуха до объема 0,3 мл и полученный раствор наносят на пластинку "Силуфол" радом со стандартной шкалой.
    Пластинку помещают  в  хроматографическую  камеру  с  подвижной  фазой,
развивают  на  высоту  10 см, после чего вынимают из камеры, подсушивают на
воздухе,  опрыскивают  проявляющим реактивом и, не подсушивая, помещают под
источник   УФ-света.   После  пятиминутной  экспозиции  пластинку  вторично
обрабатывают   проявляющимся   реактивом  и  снова  помещают  под  источник
УФ-света.  Ацетал проявляется  в виде серо-зеленых пятен на светлом фоне  с
R  = 0,6 +/- 0,1.
 f
Для количественного определения измеряют с помощью прозрачной миллиметровой бумаги площади пятен проб и близких им по интенсивности окраски пятна стандартной шкалы.

2.7. Обработка результатов анализа

Содержание ацетала в объекте (Х) в мг/кг (мг/л) вычисляют по формулам:

                         100 х А х V
                                    2
                     Х = ------------ (для метода ГЖХ);
                          V  х Р х R
                           1

                         100 х В х S
                                    пр
                     Х = ------------- (для метода ТСХ),
                          S   х Р х R
                           ст

    где:
    А  - количество ацетала в хроматографируемом объеме пробы, найденное по
калибровочному графику;
    В - количество ацетала в стандартном пятне, мкг;
    V  - объем аликвоты, мл;
     1
    V  - общий объем пробы, мл;
     2
    Р - количество анализируемой пробы, г (мл);
    R - степень определения, найденная предварительно, %;
    S  , S   -  площади пятен пробы и стандартного раствора соответственно,
     пр   ст
кв. мм.

3. Требования безопасности

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях, а также Правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы МЗ СССР N 2455-81 от 20.10.1981.

4. Разработчики

Пиленкова И.И., Юркова Р.Г.
Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт гербицидов и регуляторов роста растений (ВНИИТИГ), г. Уфа.

Методические указания апробированы в институтах ВНИИХСЗР (т. Новикова К.Ф., Алдомина Т.В.) и институте физиологии растений АН УССР (т. Кофман И.Ш.).