"Методические указания по измерению концентраций 2-амино-4,6-диметил-1,3-пиримидина в воде методом жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6152-91)	
Документ предоставлен КонсультантПлюс

www.consultant.ru

Дата сохранения: 04.09.2018

Источник публикации
"Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. Сборник N 25". М., ЦНТИПР, 1997
Примечание к документу

Название документа
"Методические указания по измерению концентраций 2-амино-4,6-диметил-1,3-пиримидина в воде методом жидкостной хроматографии"
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 N 6152-91)

Утверждены
Министерством здравоохранения СССР
29 июля 1991 г. N 6152-91

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ 2-АМИНО-4,6-ДИМЕТИЛ-1,3-ПИРИМИДИНА
В ВОДЕ МЕТОДОМ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов в продуктах питания, кормах и объектах окружающей среды.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

1. Краткая характеристика препарата

2-Амино-4,6-диметил-1,3-пиримидин (аминопиримидин) является полупродуктом получения препаратов "Анкор-5" и "Анкор-85", рекомендуемых в качестве гербицидов, и представляет собой тонкодисперсный порошок светло-серого и белого цвета.
Структурная формула:

        N___________CH
        //    \\      3
    NH //      \\
      2\        /
        \______/
        N───────────CH
                      3

    Эмпирическая формула С H N .
                          6 9 3
    Молекулярная масса 123,0.
    Растворяется в воде, метаноле, этаноле, метиленхлориде и хлороформе.
    ЛД   для крыс - 970 мг/кг.
      50
ОБУВ аминопиримидина для воды - 20 мкг/л.

2. Методика определения аминопиримидина

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода
Определение основано на извлечении анализируемого вещества из воды, насыщенной NaCl, экстракцией метиленхлоридом, концентрировании вещества упариванием растворителя и последующем определении его методом жидкостной хроматографии с УФ-детектором (226 нм) на колонке, заполненной насадкой "Силасорб-600".
2.1.2. Избирательность метода
Метод обеспечивает полную селективность. Определению не мешают полупродукты получения.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Диапазон измеряемых концентраций аминопиримидина в воде от 10 до 50 мкг/л.
Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме 2 мкг.
Нижний предел измерения в воде 10 мкг/л.
Суммарная погрешность не превышает 11,40%.
Время выполнения определения (включая отбор образца) аминопиримидина в одной пробе при одновременной подготовке двух параллельных образцов 3 часа.

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Ацетон осч, ТУ 6-09-3513-82.
Хлороформ хч, ТУ 6-09-4263-76.
Метилен хлористый техн., ТУ 6-09-2662-77.

КонсультантПлюс: примечание.
ГОСТ 5963-67 утратил силу на территории Российской Федерации с 1 января 2002 года в связи с введением в действие ГОСТ Р 51723-2001 (Постановление Госстандарта России от 23.03.2001 N 130-ст).	
Спирт этиловый, ГОСТ 5963-67.
Спирт изопропиловый хч, ТУ 6-09-402-81.
Гептан нормальный эталонный, ГОСТ 5.395-70.
Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72.
Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.
Раствор 1:10 в изопропиловом спирте.
Бумага индикаторная универсальная.
Окись бария ч, ГОСТ 10203-78.
Натрий хлористый чда, ГОСТ 4233-77.
2-Амино-4,6-диметил-1,3-пиримидин с установленным содержанием не ниже 98%.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Жидкостный хроматограф Милихром с УФ-детектором, ТУ 25-05-2095-77.
Потенциометр ЛКСУ-003, ТУ 25-05-2095-77.
Колонка металлическая 6,3 см с внутренним диаметром 2 мм, заполненная силикагелем "Силосорб-600", с размером частиц 5 мкм.
Цилиндр 4-50, ГОСТ 1770-74.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл, 50 мл и 25 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 10, 5, 2 мл с делениями.
Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, вместимостью 1000 мл.
Микрошприц МШ-10М, ТУ 2-833-106.

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 9737-70 Постановлением Госстандарта России от 02.06.1994 N 160 с 1 января 1995 года введен в действие ГОСТ 9737-93.	
Колбы грушевидные, ГОСТ 9737-70, вместимостью 50 мл.
Воронка В-36-50 ХС, ГОСТ 25336-82.

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 9147-73 Постановлением Госстандарта СССР от 28.10.1980 N 5174 с 1 января 1982 года введен в действие ГОСТ 9147-80.	
Чашка фарфоровая, ГОСТ 9147-73, вместимостью 250 мл.
Холодильник Х111-1-200-14/23 ХС, ГОСТ 25336-82.
Линейка измерительная, цена деления 1 мм, ГОСТ 4272-75.
Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.
Регулятор температуры УКТ-4 У-2, ТУ 25-111378-77.

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 9871-61 Постановлением Госстандарта СССР от 26.12.1975 N 4031 с 1 января 1978 года введен в действие ГОСТ 9871-75.	
Термометр контактный типа ТПК, ГОСТ 9871-61.

КонсультантПлюс: примечание.
ГОСТ 215-73 утратил силу с 1 апреля 1989 года ("ИУС", N 4, 1989). Постановлением Госстандарта СССР от 30.03.1990 N 691 с 1 января 1991 года введен в действие ГОСТ 28498-90.	
Термометр, ГОСТ 215-73, ТЛ-2, цена деления 1 °C.

КонсультантПлюс: примечание.
ГОСТ 5072-79 утратил силу с 1 января 1991 года (ИУС "Государственные стандарты", N 11, 1991).	
Секундомер механический СОП-пр.2а3-000, ГОСТ 5072-79.
Барометр БК-75, ТУ 35-04-223-75, цена деления 0,1 кПа.
Весы аналитические лабораторные общего назначения, тип ВЛА-200М, ТУ 25-06-1049-72.
Весы лабораторные технические ВЛКТ-500М, 4-ый класс, ГОСТ 24104-80.

КонсультантПлюс: примечание.
Взамен ГОСТ 7328-82 Постановлением Госстандарта России от 26.10.2001 N 438-ст с 1 июля 2002 года введен в действие ГОСТ 7328-2001.	
Набор разновесов Г-2-210, ГОСТ 7328-82.
Насос водоструйный, ГОСТ 25336-82.
Шкаф сушильный электрический 2В-151, ТУ 64-1-1411-76.
Бюксы СН-60/14 или СН-85/15, ГОСТ 7148-70.

2.4. Отбор пробы

Отбор пробы воды производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными зам. Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 N 2051-79. Объем средней пробы должен составлять 2 л.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка колонки и элюента
Для кондиционирования колонки через нее пропускают 6 мл элюента со скоростью 200 мкл/мин.
Для приготовления элюента смешивают гептан, метанол, изопропанол, хлороформ и уксусную кислоту (1:10 в изопропиловом спирте) в соотношении 60:5,5:3,5:1,5:0,1 по объему.
Метанол перед употреблением сушат окисью бария (0,5 л метанола - 50 г окиси бария), фильтруют и перегоняют.
2.5.2. Подготовка стандартных и градуировочных растворов
Стандартные растворы аминопиримидина 500 мкг/мл - раствор N 1.
Стандартный раствор используют для приготовления из него градуировочных растворов. Для этого 25 мг аминопиримидина взвешивают в мерной колбе вместимостью 50 мл на аналитических весах, записывая результат до четвертого знака.
После растворения аминопиримидина в хлористом метилене доводят объем до метки, тщательно перемешивая содержимое колбы, и рассчитывают концентрацию стандартного раствора с учетом чистоты вещества.
Стандартный раствор N 1 используют для приготовления стандартного раствора N 2. Для этого 10 мл раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем до метки хлористым метиленом.
Концентрация раствора N 2 соответствует 50 мкг/мл.
Для приготовления воды с известным содержанием аминопиримидина готовят стандартный раствор N 3. Для этого 1 мл раствора N 1 помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем до метки этанолом. Концентрация раствора N 3 соответствует 10 мкг/мл.
Затем, используя стандартный раствор N 2, готовят градуировочные растворы в хлористом метилене:
N 4 - 10 мкг/мл;
N 5 - 20 мкг/мл;
N 6 - 30 мкг/мл;
N 7 - 40 мкг/мл;
N 8 - 50 мкг/мл.
Стандартные растворы стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 месяца при условиях, исключающих испарение раствора.
Способ приготовления градуировочных растворов из стандартного раствора N 2 представлен в таблице 1.

Таблица 1

     Номер     
градуировочного
   раствора    	Стандартный раствор
N 2 (50 мкг/мл), мл	Растворитель
 хлористый  
метилен, мл 	    Концентрация    
градуиров. раствора,
       мкг/мл       	
       4       	       5,00        	   20,00    	       10,00        	
       5       	       10,00       	   15,00    	       20,00        	
       6       	       15,00       	   10,00    	       30,00        	
       7       	       20,00       	    5,00    	       40,00        	
       8       	       25,00       	     -      	       50,00        	

2.5.3. Построение градуировочного графика
Для градуировки прибора вводят в хроматограф по 10 мкл каждого градуировочного раствора не менее 3-х раз, измеряют высоту пика линейкой и строят градуировочный график зависимости высоты пика от массовой концентрации аминопиримидина в градуировочном растворе. При данной градуировке необходимо провести измерение коэффициента экстракции аминопиримидина из воды. Коэффициент экстракции определяют по отношению высоты пика аминопиримидина (экстракт из воды с дозированным количеством аминопиримидина - раствор N 3) к высоте пика аминопиримидина градуировочного раствора с той же концентрацией. При использовании градуировочного графика, построенного на основании данных, полученных после экстракции, вводить коэффициент экстракции в расчетную формулу не требуется.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция
500 мл анализируемой воды помещают в делительную воронку вместимостью 1000 мл, насыщают ее NaCl (150 г). Проводят экстракцию 3 x 50 мл хлористым метиленом в течение 1 мин. Объединенные экстракты переносят в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл, фильтруя через бумажный фильтр, смоченный хлористым метиленом. Раствор упаривают порциями в круглодонной колбе вместимостью 50 мл с дефлегматором (10 - 12 см) при температуре бани 60 +/- 5 °C (рис. 1 - не приводится). Затем баню убирают и проводят охлаждение установки до комнатной температуры. Через дефлегматор в колбу наливают 0,5 мл хлористого метилена. Колбу снимают, сушат образец на воздухе досуха, сухой остаток растворяют в 1 мл хлористого метилена, тщательно ополаскивая стенки колбы. Полученный раствор хроматографируют.
2.6.2. Условия хроматографирования
Анализируемый экстракт, подготовленный, как было изложено выше, в количестве 10 мкл вводят с помощью дозирующего устройства в колонку хроматографа и записывают хроматограмму не менее 3-х раз.
Проводят определение высоты пика и фиксируют среднее из трех определений.
Хроматограмма ацетонового экстракта представлена на рис. 2 (не приводится).
Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб
    Длина колонки, см                                    6,3
    Внутренний диаметр колонки, мм                       2,0
    Насадка колонки                                      Силосорб-600
                                                         зернением 5 мкм
    Скорость потока элюента через колонку, мкл/мин.      200
    Скорость диаграммной ленты, мм/час                   600
    Диапазон чувствительности                            0,4 - 0,8
    Объем вводимой пробы, мкл                            10
    Объем удерживания, мкл                               1000
    Линейный диапазон определения, нг                    20,0 - 100,0
    Длина волны УФ-детектора, нм                         226

2.7. Обработка результатов анализа

Перед проведением измерений ежедневно по градуировочному раствору с массовой концентрацией 30,00 мкг/мл проводят коррекцию градуировочной прямой.
Расчет содержания анализируемого вещества в пробе воды проводится по высоте пика методом соотношения со стандартом по формуле:

                              C x h x v x K x a
                          X = -----------------,
                                 hгр х V х в

где:
X - содержание аминопиримидина, мкг/л;
C - концентрация анализируемого вещества в градуировочном растворе, мкг/мл;
hгр и h - высоты пиков на хроматограммах градуировочного раствора и экстракта, мм;
v - объем экстракта после растворения остатка, мл;
a - объем градуировочного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
в - объем пробы экстракта, введенный в хроматограф, мкл;
V - объем пробы воды, взятой для анализа, л;
K - коэффициент, учитывающий потери при концентрировании.
Примечание:
Коэффициент K находят после анализа проб воды, содержащих определенное количество анализируемого вещества по формуле:

                                 А внесено
                            K = ------------.
                                А обнаружено

3. Требования безопасности

При проведении анализов необходимо выполнять правила техники безопасности при работе со стеклом, электрооборудованием, ЛВЖ, кислотами, а также соблюдать правила производственной санитарии и личной гигиены при работе в химической лаборатории.